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考点35微生物的培养技术及应用第一关小题自助餐自选狂刷题组一刷基础小卷——固知识1．[2022·甘肃兰州一中高三试题]平板冷却凝固后要将平板倒置，其目的是()A．利于大肠杆菌的生长B．防止空气进入C．利于培养基的冷却D．防止皿盖冷却水落入培养基造成污染2．[经典

模拟]下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mLA.从物理性质看，该培养基属于液体培养基；从用途看，该培养基属于选择培养基B．该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是

蛋白胨C．该培养基缺少提供生长因子的物质D．该培养基调节合适的pH后就可以接种使用3．[经典模拟]微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作中

错误的是()①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢②接种操作要在酒精灯火焰附近进行③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A．①③B．②④C．③⑤D．④⑥4．[2022·四川乐山四

校联考]某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验，实验过程包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此实验相关问题的叙述中，正确的是()A．实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉B.利用平板划线法对

细菌进行分离、纯化并计数C.观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照实验D．培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分别为细菌培养提供氮源和碳源5．[2022·安徽省黄山市高三“八校联考”]蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组目的基因常用

的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落，可以颜色为依据直接筛选重组菌。用于筛选的菌为β­半乳糖苷酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码β­半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌β­半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个

限制性酶切位点，便于插入目的基因。β­半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X-gal，使其变成蓝色物质。回答下列问题：(1)玻璃和金属材质的实验器材利用________方法灭菌。(2)培养基灭菌后，需要冷却到________℃左右时，才能倒平板。倒

平板后，平板冷凝要将平板倒置，其原因是________________________________。(3)为防止杂菌污染，培养基中要添加________。蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了__

______。(4)最终培养基出现的白色的菌落是()A．目的基因和载体结合B．只含目的基因C．只含载体(5)若需要长期保存该菌种，可采用的方法是________。题组二刷提升小卷——培素养6．[2022·湖北襄阳市模

拟]下列有关细菌培养的叙述，正确的是()A．不同细菌的菌落特征一般相同B．在培养基中加入青霉素可促进细菌生长C．用液体培养基培养破伤风杆菌的过程中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长D．培养醋酸杆菌时，往培养液

中通入氧气可以促进菌体快速增殖7．[2022·辽宁沈阳市模拟]下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是()A．微生物培养基中并不都必须添加碳源或氮源B.倒平板时，应将打开的培养皿皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．接种前后，接种

环都要在酒精灯火焰上进行灼烧D．实验结束后，带菌的培养基必须经灭菌处理后才能倒掉8．[2022·天津市高三二模]为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。下列叙述错误的是()A．步

骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是步骤③的培养基中石油是唯一碳源B．步骤⑤振荡培养的目的是提高培养液溶氧量，同时使菌体与培养液充分接触C．图B培养基的结果可能是由于涂布不均匀造成的D．步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出能分解石油的细菌9．[2022·湖北襄阳市

一模]巴氏杀菌乳是以生牛(羊)乳为原料，经巴氏杀菌等工序制得的液体产品，杀灭了牛奶中有害菌群的同时也保存了营养物质和纯正口感。据国家标准每毫升合格巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过50000个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶合适的消毒温度的探究，相关实验操作不合理的是()A．配制牛肉膏蛋白胨培养

基并在121℃、100kPa条件下处理15～30minB．将等量的新鲜牛奶分别置于60℃、70℃、80℃、90℃恒温水浴锅中处理30minC.对处理后的牛奶进行梯度稀释后，利用涂布法接种平板并在37℃下培养24hD．统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为牛

奶最适消毒温度10．某同学从植物中提取了W物质，并研究其抑菌效果。在平板中央处打孔后加入提取物W，在适宜条件下培养一段时间测量抑菌圈的大小并计算抑菌圈平均增幅速率，实验方法和结果如下图所示。据图分析下列说法错误的是()A．将一定量菌液与冷却后的灭菌培养基混

匀并倒平板可得到试验菌平板B．在平板上打孔的钢管需要灼烧灭菌，目的是防止微生物污染平板C．提取物W在培养基中扩散，加入提取物W后的2小时可获得最佳抑菌效果D．菌体浓度、提取物W的浓度和扩散时间会对抑菌圈直径的大小造成影响题组三刷

专项小卷——提考能11．[2022·阜新市高三模拟](不定项选择)下列关于无菌操作的叙述正确的是()A．对培养皿中的菌株进行稀释时，盛有无菌水的试管仅消毒处理，会造成杂菌污染B.加入培养基中的指示剂和染料不需要

灭菌C.利用组织培养技术繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒D．接种时灼烧接种环后立刻对菌种划线12．[2021·江苏苏州市三模](不定项选择)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化

肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。以下叙述正确的是()A.步骤①土样应取自当地深层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍B．自生固氮菌是自养型生物，不可用血细胞计数板来计数土壤悬浮液中的菌体数C．步骤②需充分振荡2

0min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中D．步骤④所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源13．[2022·江苏盐城市高三模拟](不定项选择)乳链菌肽对许多革兰氏阳性菌，尤

其是对引起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，研究人员从新鲜牛奶中获得多株产乳链菌肽的菌株，筛选并纯化菌株。为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌(细胞破裂)还是非溶菌性杀死细菌，

科研人员将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发酵时间的延长，检测革兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实验结果如图所示。下列叙述正确的是()A．制备培养基时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量氯

化钠，以维持渗透压B.纯化的菌株临时保藏需要先接种到试管的固体斜面培养基上在合适的温度下培养，长成菌落后放入4℃冰箱中保藏C．以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为抑制细菌生长D．口服乳链菌肽，不会改变人体肠道中的正常菌群，也不会进入内环境，推测可能的原因是被消

化道中蛋白酶所降解而被人体消化14．(不定项选择)漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是()A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B．筛选培养基中需要加入

漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化D．斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株15．(不定项选择)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述不正确的是()A．高压灭菌加热结束后，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．

倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上16．(不定项选择)秸秆还田可增加土壤肥力，缓解环境污染。为分离分解纤维素的微生物菌种，实现废物的资源化利用，研究人员设计了“土壤取

样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌株”的实验流程。下列叙述正确的是()A.配制培养基时，应在高压蒸汽灭菌之后调节pHB．选择培养时，应使用纤维素为唯一碳源的培养基C．进行梯度稀释时，应在酒精灯火焰旁完成各种操作D．挑选菌株后，应将使用过的培养

基进行灭菌后再丢弃题组四刷真题小卷——登顶峰17．[2021·天津卷]下列操作能达到灭菌目的的是()A．用免洗酒精凝胶擦手B．制作泡菜前用开水烫洗容器C．在火焰上灼烧接种环D．防疫期间用石炭酸喷洒教室18．[20

21·浙江6月选考]下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是()A．测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板B．红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数C．涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细胞计数D．酵母菌在液体培养基中培养一段时

间后，可用比浊计测定其密度19．[2021·山东卷]解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲

菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是()A．甲菌属于解脂菌B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力20．[2021·北京卷]人体皮肤表

面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是()A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断21．[2021·山东卷]含硫蛋白质在

某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若

两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是()A.乙菌的运动能力比甲菌强B．为不影响菌的运动需选用液体培养基C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染22．[2020·浙江7月]下列关于微生物培养及利用

的叙述，错误的是()A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌

活化第二关大题自助餐自选精做题组一等级考试题专项练1．[2021·湖南卷]大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达12～38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便

和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即__________________。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以________为唯一碳源

的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于________培养基。(2)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是________________________。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是_____

___________________________。(3)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路_______________________________________________________

____________________________。(4)为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株________，理由是_________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_________________________________________。菌株秸秆总重(g)秸秆残重(g)秸秆失重(%)纤维素降解率(%)A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.32

2.[2021·浙江1月，节选]回答下列(一)小题：(一)某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。(1)从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或________法，两种方法均

能在固体培养基上形成________。对分离的菌株进行诱变、________和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。3．[2021·广东卷]中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜(甘蔗榨糖后的废弃液，

含较多蔗糖)为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。回答下列问题：(1)为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为________，并不断提高其浓度，经多次传代培养(指培养一段时间后，将

部分培养物转入新配的培养基中继续培养)以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用______________的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有____________________等。(答出两种方法即可)(2)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种

不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是________________________________________________

___________________________________________________________________________________。(答出两点即可)(3)研究人员在工厂进行扩大培养，在适

宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中________可能是高密度培养的限制因素。(4)菌株H还能通过分解餐厨垃圾(主要含蛋白质、淀粉、油脂

等)来生产PHA，说明其能分泌________________________。4．[2021·浙江6月，节选]回答下列(一)小题：(一)回答与甘蔗醋制作有关的问题：(1)为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣

为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，调节pH，再高压蒸汽灭菌，经________后加入3%体积的无水乙醇。然后将10g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，振荡培养24h。用________将少

量上述培养液涂布到含CaCO3的分离培养基上，在30℃培养48h。再挑取分离培养基上具有________的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的________培养基上培养24h后，置于4℃冰箱中保存。(2)优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段

时间后，取合适接种量的菌液在30℃、150r/min条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中________含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有_____________________________________________

_____________________________________________________________________________________________(答出2点即可)等特点。5．[2020·江苏卷]产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶

酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是________(填编号)。编号①②③④物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧(2)称取1.0g某土壤样品，转入

99mL无菌水中，制备成菌悬液，经________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌________个。(3)为了进一步提高酵母菌

产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径________的菌落，纯化后获得A、B

两突变菌株。(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株________进行后续相关研究，理由是___________

___________________________________________________________________________________________________________________________

__。6．[2018·江苏卷，31]酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，

并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的______________，及时对培养基进行分装，并进行_______

_______灭菌。(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约________(在25℃、50℃或80℃中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。(3)挑取分离平板中长出的单菌落，

按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有_________。a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株(4

)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和________供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上________色细胞的个数应不少于________，才能达到每

毫升3×109个活细胞的预期密度。题组二科学探究类专项练7．[2022·广西北海市模拟]某研究小组发现类产碱假单胞菌对黄脊竹蝗有较强的感染力，并可引起其发病死亡，该小组成员以此展开实验探究。回答下列问题：(1)用来培养类产碱假单胞菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，在此培养基中，为微生物

提供碳源的物质是________________________。培养基配制时，灭菌和调pH的先后顺序为__________________。对培养基进行灭菌所用的仪器是______________。(2)在培养类产碱假单胞菌的过程中，培养皿应倒置培养，其原因是__________

_。(3)进行实验时，若要频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用________________________方法对其进行保存，这种方法的缺点是________________________________。(4)研究发现：黄脊竹蝗幼

虫在自然状态下感染类产碱假单胞菌后，于24小时后开始死亡，72小时达到死亡高峰，染病后出现行动迟缓，伴有轻微痉挛的现象。为验证此菌是蝗虫致死的原因，该研究小组成员从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并用该菌________

__________，观察到的现象是__________________________________________________________________________________________

______________________。8．[2021·金太阳大联考]褐煤碳化程度低、易挥发、易自燃，易污染环境，不利于储存和远距离运输。利用微生物处理对褐煤进行气、液转化降解，形成清洁、经济有效的能源物质，对保护环境及油气安全供应有着重要意义。回答下列相关问题：(1

)为了筛选到能高效降解褐煤的细菌，应选择的采集样本的场所为__________；筛选时采用的培养基应该以________为唯一碳源，可用________________法接种。(2)研究者利用营养肉汁琼脂培养基(如下)进行实验，拟从4种备选细菌中筛选出对某地褐煤降解

效率高的菌种。蛋白胨氯化钠牛肉浸取物琼脂蒸馏水5.0g5.0g3.0g15.0g1.0LpH值调至7①营养肉汁琼脂培养基中，蛋白胨的作用是________________________，琼脂的作用是__________

__________。②完成筛选的实验思路：在适宜条件下分别培养等量的4种备选细菌，分别加入________________，一段时间后_________________________________________________。9．[2

022·吉林长春市高三模拟]2021年6月1日起，江浙沪Starbucks所有门店将全面试用Foopak生物可降解饮品杯。该饮品杯经填埋处理后，能被微生物经分解作用完全降解，可替代传统塑料及普通部分降解饮品杯，从而避免“白色污染”。回答下列问题：(1)从填埋Foo

pak生物可降解饮品杯的土壤中分离Foopak分解菌时，应先从土壤取样，并接种在液体培养基上进行选择培养，目的是________________；再将选择后的样品进行梯度稀释，________________接种到固体培养基上，需进行梯度稀释的原因是_

_________________________________________________________________________________。(2)在整个分离过程中无杂菌污染，培养基上出现多种菌落特征，最可能的原因是____

____________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)在

测定培养液中Foopak分解菌的数量时，需至少做三个重复实验。做重复实验的目的是________________，做重复实验的方法是__________________________________。10．[2022·广东高三模拟]苹果醋是当下流行的风味饮品，是苹果

汁经发酵后，再添加适量苹果汁等原料而制成的饮品。苹果醋中的乙酸有软化血管、降低血压，能有效预防高血压和心脑血管疾病。下图是苹果醋饮品的工厂生产过程图。回答下列有关问题：(1)得到果醋醪液需要经过两次发酵，发酵②需要的发酵条件是_____________

____________________________________________________________________________(写出2点)。(2)苹果醋含有较高浓度的乙酸，能够引起___________

_________________，导致细菌死亡，使得大多数微生物不能生长繁殖，但市场保质期内的苹果醋饮品有时会发生“变质”问题。某同学分析出现“变质”的原因可能如下：①可能在灌装或包装过程中无菌操作不够规范，引起了耐酸性细菌污染

；②两次无菌操作采用________________，虽然使得饮品风味口感保持不变，但不能杀死耐热性微生物；③苹果浓缩汁中出现了食品污染常见的某种杆菌，在不利条件下形成芽孢或孢子，在条件适宜时其大量繁殖，引起变质。11．[2022·黑龙江佳木斯市模拟

]谷氨酸钠是味精的主要成分，工业生产中常用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸。下表是生物兴趣小组探究发酵条件对微生物数量和产物生产的影响。组别发酵条件谷氨酸棒状杆菌繁殖速率单个菌体产谷氨酸量第一组通入无菌空气C/N＝3∶1较慢较多第二组通入无菌空气C/N＝4∶1较快较少请分析回答下

列问题：(1)谷氨酸棒状杆菌发酵的培养基中主要营养物质有________________，该培养基是一种________培养基。(2)得到谷氨酸棒状杆菌数目可采用的计数方法是________________，用该方法计数过程：取第二组的100倍的稀

释液滴加到计数板(由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1mm3)共有菌体42个，则1mL的第二组发酵液中有菌体________个。(3)由上述探究可知，要通过发酵得到大量谷氨酸，需首先不断向发酵液中通入_____

___，将碳氮比设为________培养一段时间，然后将发酵液中碳氮比改为________继续培养。12．[2022·辽宁高三模拟]大肠杆菌是一类引起人和幼畜腹泻的重要病原菌，可通过食物和水源等途径传染。某生物兴趣小组欲从某患病犊牛粪便中检测大肠杆菌的数量，并分离培养及鉴定。请回答下列问题。(1)

取10g新鲜的犊牛粪便按图示方法分离大肠杆菌，通过统计①平板上的菌落数，可推测出样品中大约含有的活菌数，其原理是______________________________。若按照图中①平板上的菌落数来计算，每克犊牛粪便中活菌数应为________。(2)分离出的大

肠杆菌可通过图中两种接种方法进一步纯化，A所示的方法应如何使菌液在培养基上均匀分布？________________________；B所示的接种方法中用到的接种用具应如何灭菌？_______________________________________________

_______________________________________________________________________________________。(3)接种好的培养基放入恒温箱中应倒置培养，这样做是为了________________。为检测培养基

的制备是否合格，应该怎么做______________________________。(4)兴趣小组进一步采用滤膜法测定犊牛饮用水中大肠杆菌的数量，过滤器滤膜的孔径需________(填“大于”或“小

于”)大肠杆菌的直径，先将1000mL饮用水进行过滤，再将滤膜转移到________培养基上，最后培养基置于适宜条件下培养，得到________(填颜色)的菌落，根据菌落数可判断大肠杆菌的数量。(5)某位兴趣小组的同学用未经稀释的

菌液涂布平板，结果培养基上被菌铺满，他把沾有噬菌体的小纸片放在该培养基上继续培养，结果如图，请推测出现透明圈的原因是_______________________________________________________

_______________________。