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课后分层检测案13基因工程的基本操作程序【基础强化题组】（学业水平一、二、三）1．在基因工程技术中，限制酶主要用于（）A．目的基因的提取和导入B．目的基因的导入和检测C．目的基因与载体结合和导入D．目的基因的提取和与载体结合2．DNA的复制需要引物，主要原

因是（）A．可加快DNA的复制速度B．引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合C．引物的5′端有助于DNA聚合酶的延伸DNA链D．DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链3．利用苏云金芽孢杆菌的抗虫基因培育的抗虫棉，培育是否成功，最好检测（）A．是否有抗生

素产生B．是否有目的基因表达C．是否有抗虫的性状出现D．是否能分离到目的基因4．要检测受体DNA中是否成功插入了目的基因，需要用基因探针，这里的基因探针是指（）A．用于检测疾病的医疗器械B．带标记的与目的基因互补的核酸序列C．带标

记的蛋白质分子D．人工合成的免疫球蛋白5．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是（）A．分子杂交技术B．抗原—抗体杂交C．抗虫或抗病的接种D．花粉管通道法6．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要

的产品。下列选项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是（）A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNAC．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D．酵母菌细胞中提取

到人干扰素蛋白7．下列关于基因工程的叙述，正确的是（）A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B．限制性内切核酸酶只在获得目的基因时才用C．重组质粒的形成只能在细胞内完成D．质粒分子上的抗性基因有利于目的基因的表达8．科学家利用基因工程技术将鱼的

抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培育转基因番茄的过程中，下列叙述不正确的是（）A．可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因B．在番茄细胞中检测到抗冻蛋白基因即证明转基因技术成功C．将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体

D．利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞9．烟草是有重要经济价值的双子叶植物，易受TMV（烟草花叶病毒）感染而大幅度减产。绞股蓝细胞中含有抗TMV基因，能抵抗TMV感染。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV

烟草，操作流程如图。（1）①表示遗传信息流动中的过程，所需原料为。过程③所需要的工具酶是。（2）大量扩增目的基因可以使用PCR技术，该技术包括变性、复性、延伸三个步骤，变性这一步骤的目的是，复性的目的是。（3）过程

④最常用的方法是，过程⑤用到的细胞工程技术是。（4）过程⑥还需要进行基因工程操作步骤中的，其中，在个体水平上检验获得的烟草能否抗TMV的方法是________________________________

________________________________________。【综合应用题组】（学业水平四）10．图甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位点。培育转基因大肠杆菌的叙述错误的是（）A．若通过PCR技术提取该目的基因，应该选用引物甲和引物

丙B．图中质粒和目的基因构建表达载体，应选用BclⅠ和HindⅢ剪切C.若将基因表达载体导入受体细胞中，需选用感受态的大肠杆菌D．在受体细胞中，氨苄青霉素抗性基因和目的基因可同时表达11．如图表示利用致病病毒M（DNA病毒）的表面蛋白基因和无害病毒N，通过基因工程制作重组M病毒疫苗的部

分过程。①～⑤表示操作流程，a～h表示分子或结构。据图判断不正确的说法是（）A．图中所示的①②③过程中，用作载体的DNA来自分子cB．图中c所示质粒可能是由细菌或者病毒的DNA改造的C．图中所示过程中，获取

目的基因的步骤是流程①、②D．在流程③中必须实施的步骤有切割质粒、将质粒与目的基因重组12．为增加玉米抗旱性，研究者构建含有某微生物抗旱基因E的重组质粒，采用农杆菌转化法转入玉米幼胚组织细胞中，用E蛋白的抗体进行抗原—抗体杂交检测后，经进一步鉴定，筛选出抗旱的转基因玉米。下列相关叙述不正确

的是（）A．提取该微生物mRNA逆转录为cDNA，通过PCR可获得大量目的基因B．将重组质粒置于经CaCl2处理的农杆菌悬液中，可获得转化的农杆菌C．用农杆菌转化法将E基因转入玉米幼胚组织细胞需要严格无菌操作D．用E蛋白的抗体进行抗原—抗体杂

交，可在个体水平检测转基因玉米的抗旱性状13．利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如下图所示，下列叙述不正确的是（）A．过程①需要进行碱基互补配对B．图中质粒的化学本质是DNAC．过程③需要用CaCl2溶液处理大肠杆菌D．过程④只需进行DNA检

测即可确定是否成功获得了“工程菌”14．为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图甲），拟将其与质粒（图乙）重组，再借助农杆菌导入菊花中。下列操作与实验目的不相符的是（）A．用限制性内切核酸酶EcoRⅠ和DNA连接酶构建

重组质粒B．用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞C．在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞D．用分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上15．图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tetr）和氨苄青霉素抗性基因（ampr）。请回答

下列问题：（1）EcoRV酶切位点为，EcoRV酶切出来的线性载体P1为末端。（2）用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在酶的作用

下，形成重组质粒P3。（3）为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“＋”代表生长，“－”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是（填表中字母）类，另外

两类菌落质粒导入情况分别是、。菌落类型平板类型ABC无抗生素＋＋＋氨苄青霉素＋＋－四环素＋－－氨苄青霉素＋四环素＋－－（4）为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，

PCR鉴定时应选择的一对引物是。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段，原因是___________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________。【素养养成练】16．人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程

如下图。RT－PCR过程需先进行逆转录合成DNA，然后再进行PCR。图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点，neor为新霉素抗性基因，BLG基因为β－乳球蛋白基因（其在山羊乳腺细胞中特异性表达，作为启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动hlF基因转录出mRNA），GF

P基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：（1）过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT－PCR，是因为。在RT－PCR过程中，加入的引物需在端添加两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEB质粒中。（2）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是___________

______________________________________________________________________________________________________

_______________________________。（3）过程③中利用磷脂分子构成脂质体介导的原理是。我们还学过利用法将基因表达载体导入动物受体细胞。（4）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新

霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中，以筛选出转染成功的细胞。（5）科研过程中，也可以用PCR技术检测受体细胞是否成功转入了目的基因。提取转染后的细胞的全部DNA分子，用目的基因的

引物扩增。扩增完毕后，检测发现扩增产物中除目的基因外，还有其他不同大小片段的非目的基因片段，可能的原因一般有。①模板受到污染②退火温度过高③引物太短④延伸温度偏低